摘要：目的基于中药质量标志物（qualitymarker，Q-Marker）的概念，研究厚藤提取物对急性痛风性关节炎（acutegoutyarthritis，AGA）大鼠的治疗作用，并分析厚藤提取物在正常大鼠及AGA大鼠的血中移行成分，为厚藤Q-Marker的确定提供依据。方法采用尿酸钠建立AGA大鼠模型，考察厚藤提取物对AGA大鼠关节肿胀指数、足垫肿胀程度和滑膜组织病理变化的影响，考察厚藤提取物对AGA大鼠血清中白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、巨噬细胞炎性蛋白-1α（macrophageinflammatoryprotein-1α，MIP-1α）和MIP-2水平的影响。采用液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱（LC-Q-TOF-MS/MS）技术对厚藤提取物进行定性分析，探寻正常大鼠和AGA大鼠ig厚藤提取物后的入血成分。结果与模型组比较，厚藤提取物组大鼠关节肿胀指数和足垫厚度均显著降低（P＜0.05、0.01），厚藤提取物高、中剂量组大鼠血清中IL-1β、MIP-1α和MIP-2水平均显著降低（P＜0.05），厚藤提取物高、中剂量组大鼠滑膜组织炎性细胞浸润减轻。从厚藤提取物中鉴定出树脂糖苷类、黄酮类、有机酸类、香豆素类、核苷类、木脂素类等53个成分，其中有机酸类和黄酮类为其主要成分，并推测了树脂糖苷类、黄酮类、有机酸类、香豆素类部分成分的裂解规律；正常大鼠含药血浆中鉴定出苹果酸、咖啡酸、咖啡酸甲酯和对羟基苯甲酸4个成分，AGA大鼠含药血浆中鉴定出莨菪亭、咖啡酸、咖啡酸甲酯和对羟基苯甲酸4个成分。结论厚藤提取物能够明显改善AGA大鼠关节肿胀，抑制血清中IL-1β、MIP-1α及MIP-2水平，并抑制炎症反应；采用LC-Q-TOF-MS/MS技术可快速鉴定厚藤水提物的主要成分为有机酸类和黄酮类，莨菪亭、咖啡酸、绿原酸及其异构体（新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C）和原儿茶酸在AGA大鼠中以原型成分或代谢物形式入血，可作为厚藤治疗AGA的Q-Marker。
痛风是嘌呤代谢紊乱造成皮下组织、关节周围、骨骼及尿路中尿酸盐结晶沉淀而引发的病变，我国痛风发病率1%～3%，为仅次于糖尿病的第2大代谢类疾病[1-2]。急性痛风性关节炎（acutegoutyarthritis，AGA）是痛风急性发作期的首发症状，其发病机制与炎症反应和高尿酸血症密切相关[3]。目前临床上针对AGA的化学药物多为秋水仙碱、非甾体类抗炎药物、糖皮质激素等[4]，普遍存在不良反应，临床应用上受到一定的限制。目前越来越多的研究从中西医结合的途径入手，探索中医药在治疗AGA的优势。厚藤Ipomoeapes-caprae(Linn.)Sweet为旋花科番薯属植物，是我国南方沿海地区常用的海洋中药，其味辛、苦，性微寒，归肺、肝、胃、大肠经，具有祛风除湿、消痈散结、拔毒消肿的功效，常用于治疗腰肌劳损、风湿关节痛等疾病[5-6]。厚藤具有抗炎、镇痛、抗肿瘤、抗氧化、免疫调节等多种药理活性[7]。抗炎活性与厚藤祛湿拔毒等传统功效密切相关，被认为是其主要的药效作用。目前其抗炎活性研究多停留在验证传统功效层面，未见对其作用机制进行深入研究的报道，也未见对其化学成分与药理作用之间关联性进行研究的报道。基于刘昌孝院士[8]提出质量标志物（qualitymarker，Q-Marker）的概念，本研究利用液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱（LC-Q-TOF-MS/MS）技术，在药物有效的前提下，分别对正常大鼠和AGA大鼠ig厚藤提取物后的含药血浆进行分析，为厚藤Q-Marker的确定及其药材的质量标准研究提供依据和思路。1材料
1.1动物
SPF级雄性SD大鼠，6周龄，体质量（±10）g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，动物许可证号SCXK（湘）-。动物饲养于温度（23±2）℃、湿度50%～60%、12h/12h昼夜交替光照的环境中，自由进食饮水。动物实验经广西中医药大学动物伦理委员会批准（批准号DW-）。1.2药材
厚藤于年4月20日采自广西防城港市北仑河口国家级自然保护区，经广西中医药大学韦松基教授鉴定为旋花科植物厚藤I.pes-caprae(L.)Sweet。1.3药品与试剂
尿酸钠（批号U-5G）购自美国Sigma公司；秋水仙碱片（批号）购自西双版纳版纳药业公司；4%多聚甲醛（批号）购自Biosharp公司；EDTA脱钙液（批号E）购自北京索莱宝科技有限公司；白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、巨噬细胞炎性蛋白-1α（macrophageinflammatoryprotein-1α，MIP-1α）、MIP-2多因子试剂盒（批号）购自美国BIO-RAD公司；质谱级甲醇、乙腈购自美国ThermoFisherScientific公司）；色谱级甲酸购自日本TCI公司；异槲皮苷对照品（批号DST-）购自德思特生物公司；绿原酸对照品（批号AF）购自成都埃法生物科技公司；异莨菪亭对照品（批号PS）购自成都普思生物科技公司）；阿魏酸对照品（批号MUST-）购自成都曼思特生物公司；对照品秦皮乙素（批号）、异绿原酸C（批号）、异绿原酸A（批号）、异绿原酸B（批号）、咖啡酸（批号）购自上海融禾医药科技有限公司；以上对照品质量分数均≥98%。1.4仪器
ExionLCAC液相色谱仪、XRQTOF质谱仪、SCIEXOS2.0数据处理软件（美国SCIEX公司）；CPAD万分之一天平（德国赛多利斯科学仪器北京公司）；KQ-DE型数控超声仪（昆山市超声仪器公司）；Hei-VAP型旋转蒸发仪（德国Heidolph公司）；TGL-16M型台式高速冷冻离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）；X-Luminex多功能流式点阵仪（美国Luminex公司）。2方法
2.1厚藤提取物的制备
称取厚藤地上部分粗段，加入12倍量水煮沸后再煎30min，滤过；再加入10倍量水提取1次，合并2次滤液，55℃减压浓缩至稠膏。2.2动物分组、造模与给药
大鼠随机分为对照组、模型组、秋水仙碱（0.27mg/kg）组和厚藤提取物高、中、低剂量（.80、.40、.90mg/kg，分别相当于成人每日服用生药材50、25、12g）组，每组10只，另随机选取3只作为正常给药组。各给药组ig相应药物，正常给药组ig厚藤提取物（.80mg/kg），对照组和模型组ig等体积纯化水，1次/d，连续7d。第7天给药1h后，大鼠ip10%水合氯醛（3mL/kg）麻醉，正常给药组和对照组大鼠于右后侧踝关节腔注射0.1mL无菌生理盐水，其余各组大鼠于右后侧踝关节腔注射0.1mL尿酸钠溶液（0.5g/10mL），建立AGA模型[9]。造模后，各给药组ig相应药物，1次/d，连续2d。2.3厚藤提取物对AGA大鼠踝关节肿胀指数和右后足垫厚度的影响
造模后观察各组大鼠关节肿胀和右后足垫肿胀程度，并计算关节肿胀指数。关节肿胀指数＝测定时间点关节周径－初始关节周径
2.4厚藤提取物对AGA大鼠血清中IL-1β、MIP-1α和MIP-2水平的影响
大鼠禁食不禁水12h，末次给药后1h，腹主动脉采血至含肝素钠的采血管中，r/min离心10min，取上清液，按照试剂盒说明书测定各组大鼠血清中IL-1β、MIP-1α和MIP-2水平。2.5厚藤提取物对AGA大鼠滑膜组织病理变化的影响
大鼠脱颈椎处死，取各组大鼠踝关节滑膜组织，浸泡于4%多聚甲醛中，脱钙后包埋于石蜡中制成组织块，随后采用苏木精-伊红（HE）染色，显微镜下观察滑膜组织病理变化。2.6供试品溶液的制备
取适量厚藤提取物稠膏于蒸发皿中，55℃水浴烘干，取0.1g提取物粉末，精密称定，加入20mL50%甲醇，密塞称定质量，超声提取30min，冷却至室温后再次称定质量，以50%甲醇补足质量，摇匀，经0.22μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。2.7对照品溶液的制备
分别取秦皮乙素、咖啡酸、异槲皮苷、异莨菪亭、绿原酸对照品适量，精密称定，加入甲醇配制成各成分质量浓度为10μg/mL的混合对照品溶液。分别取异绿原酸C、异绿原酸B、异绿原酸A、阿魏酸适量，加入甲醇配制成质量浓度为10μg/mL的对照品溶液。2.8血浆样品的制备
将正常给药组、对照组、模型组、厚藤提取物高剂量组同组血浆混合，各吸取1mL，加入3倍量甲醇-乙腈（1∶1）溶液沉淀蛋白，涡旋3min，4℃、10r/min离心10min，取上清液，经0.22μm微孔滤膜滤过，氮气吹干至固状，残渣加入μL甲醇，超声3min，涡旋混匀1min，4℃、10r/min离心10min，吸取上清液进行分析。2.9厚藤成分库的建立
通过CNKI、PubMed等数据库检索与厚藤相关的文献，对厚藤的化学成分进行总结，共检索到个化学成分；利用ChemBioDraw软件、PubChem（转载请注明地址:http://www.dqjpu.com/zcmbyf/102851.html
