摘要：目的基于血清蛋白组学初步探讨黄芩清热除痹胶囊（HuangqinQingreChubiCapsule，HQC）改善急性痛风性关节炎（acutegoutyarthritis，AGA）急性炎症的作用研究。方法运用Raybiotech细胞因子抗体芯片筛选治疗前10名AGA患者和10名健康志愿者的血清标本AGA特异性蛋白质。选取3例AGA患者及健康志愿者，采用Westernblotting法检测HQC干预前后特异性蛋白质的表达量；选取60例AGA患者及健康志愿者，运用ELISA法检测HQC干预后炎症因子白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子-α（tumornecrosisfactor-α，TNF-α）、转化生长因子-β（transforminggrowthfactor-β，TGF-β）、超敏C-反应蛋白（hypersensitiveC-reactiveprotein，hs-CRP）水平。结果基于蛋白质组学确定了4种AGA特异性蛋白质，包括人肿瘤坏死因子受体超家族成员II（tumornecrosisfactorreceptorII，TNF-RII）、人巨噬细胞炎性蛋白1β（macrophageinflammatoryprotein1β，MIP-1β）、人白细胞介素-8（IL-8）、人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（granulocytemacrophagecolonystimulatingfactor，GM-CSF）。Westernblotting检测结果显示对照组与AGA患者治疗前比较，TNF-RII、MIP-1β、IL-8、GM-CSF蛋白水平差异显著，AGA患者治疗前TNF-RII、MIP-1β、IL-8蛋白呈现高表达，GM-CSF蛋白呈现低表达。与治疗前比较，经HQC治疗后AGA患者血清TNF-RII、MIP-1β、IL-8水平显著降低，GM-CSF水平显著升高。ELISA检测结果显示，HQC治疗前后AGA患者血清TNF-RII、MIP-1β、IL-8、GM-CSF水平差异明显，与治疗前比较，治疗后AGA患者血清TNF-RII、MIP-1β、IL-8水平显著降低（P＜0.01），GM-CSF水平显著升高（P＜0.01）。结论HQC可能是通过调控GM-CSF、IL-8、MIP-1β和TNF-RII等特异性蛋白质的表达，从而改善AGA患者炎症状态，提高机体抗炎能力。
急性痛风性关节炎（acutegoutyarthritis，AGA）是一种关节疾病，其特征是尿酸单钠（monosodiumurate，MSU）晶体在关节及其周围组织中积聚，属于代谢性的风湿病[1]。有研究表明MSU晶体主要通过激活Toll样受体和含NACHT-LRR-PYD结构域蛋白3炎性小体信号传导导致AGA的发作[2]。通过筛选和鉴定疾病中差异表达的蛋白质，可以用于疾病发生发展的预测和诊断[3]。其中Raybiotech的抗体阵列有固定的抗体，可以鉴定培养基或体液中的分子生物，并用于蛋白质表达谱分析，这些蛋白质可以成为疾病的生物标志物，如朱佳宁等[4]利用AAH-BLG-芯片试剂盒检测息肉状脉络膜血管病变血清特异性蛋白。黄芩清热除痹胶囊（HuangqinQingreChubiCapsules，HQC）具有清热利湿、通络止痛之功，是健脾化湿清热法具体体现的代表方剂，前期研究表明HQC内服配合芙蓉膏外敷治疗AGA疗效显著[5-6]，而且能够通过腺苷酸活化蛋白激酶（adenosinemonophosphateactivatedproteinkinase，AMPK）-叉头框蛋白O3a（forkheadboxO3a,FOXO3a）-锰超氧化物歧化酶（manganesesuperoxidedismutase,superoxidedismutase2，MnSOD）信号通路改善氧化应激状态[7]。本研究基于血清蛋白质组学来识别可能引发AGA的特异性蛋白质，然后观察HQC改善AGA患者炎性反应的情况，探究其可能的机制。
1材料与方法
1.1药品与试剂
HQC来自安徽中医院制剂中心，批号Z；兔抗白细胞介素-8（interleukin-8，IL-8）抗体（批号AA）由Bioworld公司提供；兔抗肿瘤坏死因子受体超家族成员II（tumornecrosisfactorreceptorII，TNF-RII）抗体（批号）由Proteintech公司提供；兔抗巨噬细胞炎性蛋白1β（macrophageinflammatoryprotein1β，MIP-1β）抗体（批号GR）由Abcam公司提供；兔抗粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（granulocytemacrophagecolonystimulatingfactor，GM-CSF）抗体（批号25）由CST公司提供；GM-CSF检测试剂盒（批号GR-05）、IL-8检测试剂盒（批号GR-05）、MIP-1β检测试剂盒（批号GR-05）、TNF-RII检测试剂盒（批号GR-05）、超敏C-反应蛋白（hypersensitiveC-reactiveprotein，hs-CRP）检测试剂盒（批号GR-05）、白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）检测试剂盒（批号GR-05）、IL-6检测试剂盒（批号GR-05）、肿瘤坏死因子-α（tumornecrosisfactor-α，TNF-α）检测试剂盒（批号GR-05）、转化生长因子-β（transforminggrowthfactor-β，TGF-β）检测试剂盒（批号GR-05），以上检测试剂盒都来自于武汉基因美科技有限公司。
1.2受试者来源
1.2.1差异蛋白筛选受试者选取年6月至年12月在安徽中医院风湿免疫科进行治疗的AGA患者为研究对象。应用PEMS3.1统计软件包生成随机数字表，随机抽取10名AGA患者（AGA组），其中男9例、女1例，年龄17～78岁；通过体检招募了10名健康志愿者作为对照组，其中男9例、女1例，年龄18～72岁，作为差异蛋白筛选受试对象。
1.2.2ELISA及Westernblotting检测受试者应用PEMS3.1统计软件包生成随机数字表，随机抽取从年12月至年6月在安徽中医院风湿免疫科进行治疗的AGA患者60名（治疗组），其中男45例，女15例，年龄17～78岁，并通过体检招募了60名健康志愿者作为对照组，其中男45例，女15例，年龄18～72岁，作为ELISA检测的试验对象；其中随机抽取2例男性患者，1名女性患者，年龄（57.67±10.21）岁及3例健康志愿者，其中2例男性，1名女性，年龄（50.67±12.37）岁，作为Westernblotting检测的试验对象。
本研究通过天津中医院医学伦理委员会批准（伦理批件号TYLL[K]字），所有参与者均提供书面知情同意书。1.2.3诊断标准及纳入标准诊断标准：根据年美国风湿病学会/欧洲抗风湿联盟（ACR/EULAR）痛风诊断标准[8]进行诊断。纳入标准：（1）符合AGA诊断标准；（2）患者同意本治疗方案，能配合随访治疗，并取得患者签署的知情同意书。
1.3治疗方法
符合纳入标准的60名AGA患者（AGA组）口服HQC，3次/d，3粒/次，连续治疗3周为1疗程，以3疗程为限。1.4血清样本采集
取AGA患者和健康志愿者全血5mL，室温血液自然凝固10～20min，～r/min离心20min，收集上清并于?80℃保存备用。1.5特异性蛋白质的筛选
将来自10位AGA患者和10位健康志愿者的20份血清样品进行Raybiotech抗体阵列检测[9]。应用QAH-ICM-1试剂盒并进行数据分析，将数据可视化展示，使用R包“ggfortify”对特异性蛋白质进行散点图及火山图处理，使用R包“gplots”对特异性蛋白质进行分层聚类分析，将特异性蛋白质及组别进行分类，使用R包“ggbiplot”进行主成分分析（principal转载请注明地址:http://www.dqjpu.com/zcmbzz/102988.html
